Acaricidal activity of ethanolic extracts of Stryphnodendron adstringens and Lafoensia pacari and oil resins from Copaifera sp. and Pterodon emarginatus against Sarcoptes scabiei var. suis / Atividade acaricida dos extratos etanólicos de Stryphnodendron adstringens Mart. e Lafoensia pacari A. St Hil., bem como das óleo-resinas de Copaifera sp. e Pterodon emarginatus Vogel, 1837 contra Sarcoptes scabiei var. suis

In vitro bioassay using Sarcoptes scabiei as a test microorganism is a viable method of study for diverse drugs with acaricidal properties. A great amount of assays proves the diverse and efficient biological activity of extracts and compounds from Brazilian savanna plants. This study had as main object, test and compare the acaricidal activity of four Brazilian Cerrado bioproducts: Stryphnodendron adstringens Mart., Copaifera sp., Lafoensia pacari A. St Hil. and Pterodon emarginatus Vogel, 1837. To perform this test S. scabiei mites were collected from crusts removed on ears of highly infected sows. The mites were selected and separated in Petri dishes with three different concentrations (25, 50 and 75%) of each bioproduct, to evaluate their potential acaricidal activity. The mortality of the mites was counted in each Petri dish every hour, during five hours. The statistical analyses demonstrated differences between the bioproducts tested. The oleoresin of Copaifera sp. and P. emarginatus presented the best results with 100% of mites mortality after treatment. The ethanolic extracts of S. adstringens and L. pacari demonstrated lower acaricidal activity when compared to the oleoresins, with little or no difference among the control groups tested. This bioassay demonstrated to be efficient, reliable, low cost and easy accomplishment. Oil resins from Copaifera sp. and P. emarginatus have in vitro acaricidal activity against adult females of S. scabiei var. suis.(AU)

O uso de Sarcoptes scabiei como microrganismo teste para bioensaio in vitro é um método de estudo viável para diversas drogas acaricidas. Muitos ensaios comprovam a diversidade e eficiência de atividade biocida de extratos e componentes presentes em plantas do cerrado brasileiro. Este trabalho objetivou testar e comparar a atividade acaricida de quatro bioprodutos do cerrado brasileiro: Stryphnodendron adstringens Mart., Lafoensia pacari A. St Hil., Copaifera sp. e Pterodon emarginatus Vogel, 1837. Para este estudo, ácaros S. scabiei foram colhidos em crostas removidas de orelhas de fêmeas suínas altamente infestadas. Os ácaros foram selecionados, separados e colocados em placas de Petri com três diferentes concentrações (25, 50 e 75%) de bioprodutos, para avaliar o potencial de atividade acaricida de cada um. Foi realizada a contagem da mortalidade dos ácaros em cada placa de Petri a cada hora, durante cinco horas. As análises estatísticas demonstraram diferenças entre os bioprodutos testados. As óleo-resinas de Copaifera sp. e P. emarginatus apresentaram os melhores resultados, com 100% de mortalidade dos ácaros após tratamento. Os extratos etanólicos de S. adstringens Mart. e L. pacari demonstraram menor atividade acaricida quando comparados as óleo-resinas, com pequena ou nenhuma diferença entre os resultados dos grupos controle. Este ensaio demonstrou ser uma ferramenta eficiente, confiável, de baixo custo e de fácil realização. As óleo-resinas Copaifera sp. e P. emarginatus possuem atividade acaricida in vitro sobre fêmeas adultas de S. scabiei var. suis.(AU)

Avaliação da atividade angiogênica da solução aquosa do barbatimão (Stryphnodendron adstringens) / Angiogenic activity of the aqueous solution of Barbatimão (Stryphnodendron adstringens)

RESUMO O Barbatimão (Stryphnodendron adstringens) planta medicinal encontrada no bioma Cerrado apresenta propriedades físico-químicas que lhe garante importantes atividades farmacológicas tais como: anti-inflamatória, analgésica e uma atividade protetora da mucosa gástrica. A casca do tronco é a principal matéria-prima usada para o desenvolvimento de produtos medicinais. Neste estudo, o objetivo foi investigar a influência da solução aquosa da casca do barbatimão no processo de formação de vasos sanguíneos na membrana corioalontoide de ovo embrionado de galinha. Foram utilizadas 30g da casca triturada em um litro de água. Este processo permitiu a obtenção da Solução Aquosa de Barbatimão - SAB em uma concentração de 30mg/mL. A atividade angiogênica da solução aquosa do barbatimão foi avaliada mediante realização de testes laboratoriais “in vivo”, utilizando como modelo experimental a membrana do ovo embrionado de galinha (MCA). Utilizou-se como controle indutor o Regederm®, o qual apresenta atividade angiogênica conhecida. Os resultados demonstraram que a SAB apresentou um percentual de vascularização na MCA de (50.4%) não tendo diferença (p>0,05) aos valores detectados no controle indutor (52,9%). Com os resultados obtidos, percebe-se que o barbatimão apresenta atividade angiogênica no modelo experimental utilizado.

ABSTRACT The Barbatimão (Stryphnodendron adstringens) medicinal plant found in the Cerrado biome has physicochemical properties which guarantee important pharmacological activities such as anti-inflammatic, analgesic and protective activities of gastric mucosa. The bark of the trunk is the main raw material used for the development of medicinal products. In this study, the objective was to investigate the influence of the aqueous solution of barbatimão bark in the formation of blood vessels in the membrane of embryonated chicken egg corioalontoid. 30g of shredded bark was used in one liter of water. This process enabled the obtention of aqueous Barbatimão - BSA at a concentration of 30mg / ml. The angiogenic activity of the aqueous solution of barbatimão was assessed by laboratory testing “in vivo”, using the chorioallantoic membrane of embryonated chicken egg (MCA) as an experimental model. TheRegederm® controlinductor was used, which exhibits known angiogenic activity. The results showed that the percentage of BSA showed a vascularization of the MCA (50.4%) there was no difference (p> 0.05) in the values detected in the control inductor (52.9%). With the obtained results, it is clear that barbatimão shows angiogenic activity under the experimental model used.

Characterization of diversity and genetic structure in natural populations of Stryphnodendron adstringens (Mart. ) Coville by means of allozyme markers

O S. adstringens, árvore típica do Cerrado, tem sido explorada visando suas propriedades medicinais e tanantes. Em razão do ainda incipiente conhecimento genético da espécie, este trabalho teve como objetivo caracterizar a diversidade e a estrutura genética de S. adstringens por meio de marcadores aloenzimáticos. Foram coletadas sementes em cinco mesorregiões brasileiras, sendo amostrados 627 indivíduos divididos em 16 populações localizadas nos Estados de Minas Gerais e Goiás. Foram testados 14 sistemas isoenzimáticos; destes, sete foram polimórficos com o total de 10 locos e 28 alelos. O valor de diversidade genética média (H) foi 0,226, a proporção média de locos polimórficos (P) foi 68,75, o número médio de alelos por loco polimórfico (AP) foi 2,65 e o número efetivo de alelos (Ae) foi igual a 1,29. Resultados do índice de fixação total (F= 0,003), do índice de fixação dentro de populações (f = -0,114) e, da medida de diferenciação genética (θ =0,105) foram não significativos, indicando a inexistência de estruturação genética. Na análise de agrupamento (UPGMA) foram observados dois grupos principais, o primeiro formado pela população do Parque Estadual (PE) do Rio Preto (MG), e outro, formado pelas demais populações. Se excluída a população do PE do Rio Preto das análises, G ST é drasticamente reduzido de 0,077 para 0,026. Assim, aproximadamente 2/3 do valor total de G ST verificado em S. adstringens foi devido à variação entre a população do PE do Rio Preto e as demais populações. De modo geral, os valores H e P observados em S. adstringens são compatíveis aos constatados em árvores tropicais comumente distribuídas. Por outro lado, excluindo a população do PE do Rio Preto, o valor da medida de diferenciação genética G ST foi menor que o verificado em árvores tropicais nativas e pinheiros de zonas temperadas. A semelhança entre populações avaliadas indica que o fluxo gênico ainda é alto o suficiente para prevenir a diferenciação genética, pelo menos em nível local.

The S. adstringens, a typical Cerrado (Brazilian savannah) tree, is used because of its medicinal and tanning properties. Because of the still incipient genetic knowledge of the species, the objective of this work was to characterize the diversity and genetic structure of S. adstringens by using allozyme markers. Seeds were collected in five Brazilian mesoregions, in which 627 individuals in 16 populations in the states of Minas Gerais and Goiás were sampled. Fourteen isoenzyme systems were assessed, out of which seven were polymorphic with a total of 10 loci and 28 alleles. Average genetic diversity (H) was 0.226, average proportion of polymorphic loci (P) was 68.75, average number of alleles per polymorphic locus (AP) was 2.65 and effective number of alleles (Ae) was equal to 1.29. The results of total fixation index (F= 0.003), within population fixation index (f =-0.114) and genetic differentiation measure (θ =0.105) were not significant, which shows the inexistence of genetic structure. Two principal groups were found in the cluster analysis (UPGMA), where the first one was formed by the population of State Park (PE) of Rio Preto (MG) and the other, by the other populations. If the population of PE of Rio Preto is excluded from the analysis, G ST is drastically reduced from 0.077 to 0.026. Thus, approximately 2/3 of the total value of G ST found in S. adstringens was due to the variation among the population of PE of Rio Preto and the other populations. Overall, the values of H and P found in S. adstringens are compatible with the ones found in typically distributed tropical trees. On the other hand, by excluding the population of PE of Rio Preto, the value of the G ST genetic differentiation measure was smaller than the one found in native tropical trees from temperate zones. The similarity between the assessed populations shows that the gene flow is still high enough to avoid genetic differentiation, at the local level, at least.

Stryphnodendron adstringens (Mart. ) Coville (Fabaceae) proanthocyanidins quantitation by RP-HPLC

Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville (barbatimão) is a tree belonging to the Fabaceae family, and it is commonly found in the southeastern Brazilian cerrado. The stem bark of this tree is traditionally used as an anti-inflammatory and antiseptic agent to treat leucorrhea and diarrhea, as well as to promote wound healing (owing to the presence of proanthocyanidins). Proanthocyanidins were obtained from the ethanolic extract of S. adstringens stem bark and assessed by reversed phase-high performance liquid chromatography with an ultraviolet/diode array detector. The identified compounds included gallic acid, catechin, gallocatechin (GC), epigallocatechin, and epigallocatechin gallate (EGCG). The selected markers, GC and EGCG, were simultaneously used for chromatographic validation (linearity range: 30-330 ng, equivalent to 3-33 µg/mL; r>0.998). The method showed precision (intra-day relative standard deviation [RSD]: 1.72% for GC; 1.16% for EGCG; inter-day RSD: 1.74%-2.60% for both markers), accuracy, robustness, and selectivity. The limits of detection and quantitation were 0.29 µg/ml and 0.89 µg/ml for GC, and 0.88 µg/mL and 2.67 µg/mL for EGCG, respectively. In addition, S. obovatum was evaluated and showed an average of 12.2 µg/mL for GC (equivalent to 1.22% w/w) and 14.2 µg/mL for EGCG (equivalent to 1.42% w/w) in the ethanolic extract. The quantitative results were compared to those obtained for S. adstringens, which showed that the markers are present in both species.

Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville (barbatimão) é uma árvore da família Fabaceae encontrada no cerrado do sudeste do Brasil. As cascas do caule das espécies são tradicionalmente utilizadas como agente antiinflamatório e antisséptico para o tratamento de diarreia e leucorreia, bem como para promover a cicatrização de feridas, devido à presença de proantocianidinas. Estas substâncias obtidas a partir do extracto etanólico (EE) de cascas do caule de S. adstringens foram avaliadas por cromatografia líquida de alta eficiência de fase reversa. As substâncias identificadas foram ácido gálico, catequina, galocatequina (GC), epigalocatequina e galato de epigalocatequina (EGCG). Os marcadores selecionados, GC e EGCG, foram utilizados simultaneamente para validação cromatográfica (intervalo de linearidade 30-330 ng, equivalente a 3-33 µg/mL, r>0,998). O método mostrou precisão (intra-dia DPR 1,72% para GC; 1,16% para EGCG; inter-dia DPR 1,74%-2,60% para ambos os marcadores), exatidão, robustez e seletividade. Os limites de detecção e de quantificação de 0,29 µg/mL e 0,89 µg/mL para a GC, e 0,88 ng/mL e 2,67 µg/mL para EGCG, respectivamente. Outra espécie (S. obovatum) avaliada, mostrou valores médios 12,2 µg/mL de GC (equivalente a 1,22% p/p) e 14,2 µg/mL de EGCG (equivalente a 1,42% p/p) encontrados no EE. Os resultados quantitativos comparam-se aos de S. adstringens e mostram que tais marcadores estão presentes em ambas as espécies.

Cytotoxic and genotoxic investigation on barbatimão [Stryphnodendron adstringens (Mart) Coville, 1910] extract

Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville, 1910 is a small tree, distributed widely throughout the Cerrado region of Brazil and named "barbatimão" by the Tupi-Guarani tribes, which presents astringent properties. Its ethnopharmacological uses comprise, among others, anti-inflammatory and wound healing action, and it is used in the treatment of diarrhea and gynecological problems. The phytotherapeutic use of 'barbatimão' is largely related to its tannin content, which is abundant in its bark. The main goal of the present study was to evaluate the cytotoxic, mutagenic, and genotoxic potential of the lyophilized solution of the stem bark of S. adstringens, using the Ames test, the SOS-Inductest and the SOS-Chromotest. S. adstringens presented cytotoxic activity in all tested systems, did not present mutagenic activity detectable by the Ames test and SOS-Chromotest, and showed some genotoxic effect on the SOS-Inductest. However, the metabolization of the extract by S9 fraction attenuated its genotoxic and cytotoxic activities.

Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville, 1910 é uma pequena árvore amplamente distribuída nas regiões de cerrado do Brasil, chamada de "barbatimão" pelas tribos Tupi-Guarani, que apresenta propriedade adstringente. Seu uso etnofarmacológico compreende, entre outros, efeitos antiinflamatório e cicatrizante, sendo empregada no tratamento de diarréias e problemas ginecológicos. Grande parte das aplicações do fitoterápico de barbatimão está relacionada aos taninos, abundantes em sua casca. O objetivo do presente trabalho foi avaliar os potenciais citotóxico, mutagênico e genotóxico da solução liofilizada da casca de S. adstringens, utilizando Teste de Ames, SOS-Induteste e SOS-Cromoteste. S. adstringens apresentou atividade citotóxica em todos os sistemas testados, não apresentou atividade mutagênica detectável pelo teste de Ames e SOS-Cromoteste e mostrou certo efeito genotóxico no SOS-Induteste. Porém, a metabolização do extrato pela fração S9 atenuou suas atividades genotóxica e citotóxica.

Wound-healing evaluation of ointment from Stryphnodendron adstringens (barbatimão) in rat skin / Avaliação da cicatrização da pomada de Stryphnodendron adstringens (barbatimão) na pele de rato

This study evaluated the cicatrizant effect of an ointment containing 1 percent of the ethyl-acetate fraction extracted from the stem bark of "barbatimão" (Stryphnodendron adstringens), in wounds made in the skin of rats, after 4, 7 and 10 days of treatment. Control wounds were treated with a base ointment without extract. The proliferation of keratinocytes in the area of reepithelialization was evaluated by counting the number of epithelial cells that were blocked in metaphase by vincristine sulfate. The length of the reepithelialized margin and the contraction of the wound were measured. Topical application of the "barbatimão" ointment stimulated proliferation of the keratinocytes, but had no effect on the length of the epithelium or on the contraction of the wounds.

Neste estudo, avaliou-se a atividade cicatrizante de uma pomada contendo uma fração acetato de etila 1 por cento obtida de cascas de "barbatimão" (Stryphnodendron adstringens) em feridas excisionais na pele de ratos após 4, 7 e 10 dias de tratamento. Feridas controle foram tratadas com pomada base, sem extrato. A proliferação dos queratinócitos na área reepitelizada foi avaliada através da contagem do número de queratinócitos bloqueados em metáfase, pelo sulfato de vincristina. O comprimento da margem reepitelizada e a contração das feridas foram mensurados. As feridas tratadas com barbatimão apresentaram um maior número de mitoses do que aquelas tratadas com a pomada base, em todos os tempos avaliados. A aplicação tópica da pomada de "barbatimão" estimulou a proliferação epitelial contudo não teve efeito sobre a migração dos queratinócitos ou sobre a contração das feridas.

Antioxidant capacity of extracts and isolated compounds from Stryphnodendron obovatum Benth / Capacidade antioxidante de extratos e compostos isolados de Stryphnodendron obovatum Benth

The extract from stem bark of Stryphnodendron obovatum Benth. was chromatographed on a Sephadex® LH-20 column, and yielded nine compounds: gallic acid (GA), p-hydroxybenzoic acid (PHB), gallocatechin (GC), epigallocatechin (EPG), 4'-O-methylgallocatechin (MGC), epigallocatechin-(4β→8)-epigallocatechin (EPEP), epigallocatechin-(4β→8)-gallocatechin (EPGC), robinetinidol-(4α→8)-gallocatechin (ROGC) and robinetinidol-(4β→8)-epigallocatechin (ROEP). Evaluation of the antioxidant capacity in vitro by the methods of DPPH free radical (IC50; μg/mL) and reduction of the phosphomolybdenum complex (RAC) gave the following results, respectively: crude extract 4.52 and 0.8242; ethyl-acetate fraction 4.04 and 0.9537; aqueous fraction 5.58 and 0.9275. The crude extract and ethyl-acetate fraction were shown to possess an antioxidant capacity comparable to that of vitamin C (4.93 and 1.0). The values obtained by the DPPH free-radical method for the isolated compounds were IC50 (μM): GA=8.89; PHB=10.12; GC=16.46; EPG=13.20; MGC=21.00; EPEP=6.89; EPGC=4.91; ROGC=7.78 and ROEP=6.20. Vitamin C and trolox showed 30.11 and 30.10, respectively. Dimers showed greater activity in scavenging free radicals, possibly related to the number of hydroxyls. However, compounds without a hydroxyl at position 5 of the A-ring (5-deoxy-proanthocyanidins) did not change the antioxidant activity of the DPPH free radical, as evaluated here for the first time. Among the monomers, there appeared to be a direct relationship in scavenging of free radicals because of the stereochemistry of the compounds. The presence of a methyl radical on the B-ring significantly reduced the scavenging of free radicals of gallocatechin. All compounds showed greater scavenging of radicals than vitamin C and trolox, and these two compounds showed no significant difference from each other.

O extrato das cascas de Stryphnodendron obovatum submetido à cromatografia em coluna, Sephadex® LH-20, forneceu nove substâncias: ácido gálico (GA), ácido p-hidróxibenzóico (PHB), galocatequina (GC), epigalocatequina (EPG), 4'-O-metilgalocatequina (MGC), epigalocatequina-(4β→8)-epigalocatequina (EPEP), epigalocatequina-(4β→8)-galocatequina (EPGC), robinetinidol-(4α→8)-galocatequina (ROGC) e robinetinidol-(4β→8)-epigalocatequina (ROEP). A capacidade antioxidante in vitro pelos métodos do radical livre DPPH (IC50; μg/mL) e do complexo fosfomolibdênio (CAR) apresentou os seguintes resultados, respectivamente: extrato bruto 4,52 e 0,8242; fração acetato de etila 4,04 e 0,9537 e fração aquosa 5,58 e 0,9275 demonstrando possuírem capacidade antioxidante quando comparados com vitamina C 4,93 e 1,0. Os valores obtidos pelo método do radical livre DPPH com as substâncias isoladas foram: IC50 (μM): GA=8,89; PHB=10,12; GC=16,46; EPG=13,20; MGC=21,00; EPEP=6,89; EPGC=4,91; ROGC=7,78 e ROEP=6,20. Vitamina C e trolox mostraram valores de 30,11 e 30,10, respectivamente. Os dímeros mostraram maior atividade no sequestro de radicais livres, possivelmente relacionada com o número de hidroxilas. No entanto, substâncias com ausência de hidroxila na posição 5 do anel A (5-desoxi-proantocianidinas) não alteraram o poder antioxidante frente ao radical livre DPPH, tendo sido avaliadas aqui pela primeira vez. Entre os monômeros, parece haver uma relação direta com a estereoquímica. A presença de um radical metila no anel B reduziu significativamente a atividade da galocatequina. Todas as substâncias isoladas mostraram maior atividade do que a vitamina C e trolox, e estes não mostraram diferença significativa entre si.

Avaliação das características físico-químicas e fitoquímicas de diferentes tinturas de barbatimão (Stryphnodendron barbatiman) / Evaluation of physico-chemical and phytochemical characteristics of different tinctures of barbatimão (Stryphnodendron barbatiman)

Como conseqüência da grande difusão e utilização de plantas medicinais, as indústrias vêm fabricando produtos a base de espécies vegetais, de diversas formas farmacêuticas, que têm sido comercializados em farmácias e casas de produtos naturais. No entanto, não há garantia para a grande maioria destes produtos, quanto à sua eficácia, segurança e qualidade, podendo trazer riscos à saúde do consumidor. Assim, torna-se importante o estabelecimento de protocolos padronizados de controle de qualidade para produtos fitoterápicos. Encontram-se disponíveis no mercado brasileiro tinturas de barbatimão provenientes de diversos fabricantes. Com a finalidade de avaliar a diferença entre a qualidade destas tinturas, foi realizado um estudo comparativo das características físico-químicas e fitoquímicas de tinturas de barbatimão provenientes de quatro fabricantes. Para a avaliação físico-química foram realizados ensaios de pH, densidade, resíduo seco e doseamento de taninos. A análise fitoquímica foi feita empregando cromatografia em camada delgada. As diferenças físico-químicas e fitoquímicas observadas evidenciaram a falta de padronização na produção destas tinturas.

As a consequence of the large distribution and use of medicinal plants, the industries are producing products based on plant species in various pharmaceutical forms, which have been commercialized in pharmacies and natural products homes. However, there is no guarantee for the vast majority of these products, as to their effectiveness, safety and quality, which may cause risks to the health of consumers. Therefore it is important the establishment of standardized protocols of quality control for phytotherapeutic products. Tinctures of barbatimão are available in the Brazilian market proceeding from diverse manufacturers. With the purpose to evaluate the difference between the quality of tinctures of barbatimão proceeding from four manufacturers, a comparative study of physico-chemical and phytochemical characteristics was carried out. For physico-chemical analysis, the pH, density, dry residue and tannins content were evaluated. The phytochemical analysis was made using thin layer chromatography. The differences observed in physico-chemical and phytochemical characteristics had evidenced the lack of standardization in the production of these tinctures.